Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie umfasst hauptsächlich Injektionssysteme, Infusionssysteme, Trennsysteme, Detektionssysteme und Datenverarbeitungssysteme. Im Folgenden werden ihre jeweiligen Zusammensetzungen und Eigenschaften vorgestellt.
1. Das Einspritzsystem verwendet im Allgemeinen einen Membraninjektor oder eine Hochdruck-Einspritzkammer, um den Einspritzvorgang mit einem konstanten Einspritzvolumen abzuschließen. Dies ist vorteilhaft für die Verbesserung der Reproduzierbarkeit der Probenanalyse.
2. Das Infusionssystem besteht aus drei Teilen: einer Hochdruckpumpe, einem Reservoir für die mobile Phase und einem Gradientenmesser. Der allgemeine Druck einer Hochdruckpumpe beträgt l. 47-4.4X107Pa, einstellbare und stabile Durchflussrate. Wenn die mobile Hochdruckphase die Chromatographiesäule passiert, kann sie den Diffusionseffekt der Probe innerhalb der Säule verringern, die Bewegungsgeschwindigkeit innerhalb der Säule beschleunigen, den Trenngrad verbessern und die Probe zurückgewinnen. Vorteilhaft für die Aufrechterhaltung der biologischen Aktivität der Probe. Der Speicherfehler- und Gradientenanalysator für die mobile Phase kann die mobile Phase entsprechend den Eigenschaften der stationären Phase und der Probe ändern, einschließlich der Änderung der Polarität, der Ionenstärke und des pH-Werts des Eluenten oder der Verwendung von kompetitiven Inhibitoren oder Denaturierungsmitteln. Dies ermöglicht die effektive Trennung mehrerer Substanzen, selbst wenn nur ein Satz von Unterschieden oder Isomeren vorliegt.
3. Das Trennsystem umfasst Chromatographiesäulen, Verbindungsrohre, Thermostate usw. Die Länge der Chromatographiesäule beträgt im Allgemeinen 10-50 cm (wenn zwei benötigt werden, kann ein Verbindungsrohr zwischen ihnen hinzugefügt werden) mit einem Innendurchmesser von 2-5mm, hergestellt aus hochwertigem Edelstahl oder dickwandigem Glasrohr oder Titanlegierung. Es liegt eine feste Phase mit einer Partikelgröße von 5-10 μm vor (bestehend aus einer Matrix und einem Fixiermittel). Die Matrix in der stationären Phase besteht aus Harz oder Kieselgel mit hoher mechanischer Festigkeit, die sich durch Inertheit (z. B. alkalisches Kieselgel wurde entfernt), Porosität (Porengröße bis zu 1000 ?) und eine große spezifische Oberfläche auszeichnen. Sie werden zur Kopplung mechanisch beschichtet (ähnlich der Herstellung stationärer Phasen der Gaschromatographie) oder chemisch mit verschiedenen Genen (z. B. Phosphat, quartärem Amino, Hydroxymethyl, Phenyl, Amino oder unterschiedlich langen Alkyl-Kohlenstoffketten) oder organischen Ligandenverbindungen gekoppelt . Diese feste relative Struktur weist also eine gute Selektivität auf. Beispielsweise können nach der Kopplung von Erbsenagglutinin (PSA) an die Oberfläche von porösem Kieselgel Glykoproteine in Fibroblasten isoliert werden. Darüber hinaus ist das auf der stationären Phase basierende Plasmid klein und das Säulenbett lässt sich leicht in einen einheitlichen und dichten Zustand bringen. Der Wirbelstromdiffusionseffekt lässt sich leicht reduzieren. Die Matrixpartikelgröße ist klein, die Mikroporen sind flach und der Stoffübergang der Probe im mikroporösen Bereich ist kurz. Diese sind vorteilhaft für die Reduzierung der Bandbreite und die Verbesserung der Auflösung. Gemäß der Analyse der Säuleneffekttheorie ist die theoretische Anzahl N der Platte umso größer, je kleiner die Matrixpartikelgröße ist. Dies beweist weiter, dass der Trenngrad umso höher ist, je kleiner die Matrixpartikelgröße ist. Darüber hinaus können Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie-Thermostate die Temperatur von Raumtemperatur auf 60 Grad einstellen und so die Analysezeit durch Erhöhung der Stofftransferrate verkürzen. Dadurch kann die Effizienz der Chromatographiesäule verbessert werden.
4. Zu den häufig verwendeten Detektoren für HPLC-Detektionssysteme gehören Ultraviolettdetektoren, Brechungsindexdetektoren und Fluoreszenzdetektoren.
(1) Der UV-Detektor eignet sich zum Nachweis von Proben mit Absorptionseigenschaften unter ultraviolettem (oder sichtbarem) Licht. Seine Eigenschaften: breites Anwendungsspektrum (wie Proteine, Nukleinsäuren, Aminosäuren, Nukleotide, Peptide, Hormone usw.); Hohe Empfindlichkeit (Nachweisgrenze von 10-10g/ml); Großer linearer Bereich; Unempfindlich gegenüber Temperatur- und Durchflussänderungen; Kann mit Gradientenlösungen eluierte Proben erkennen.
(2) Mit dem Differentialbrechungsindexdetektor können alle Probenkomponenten erfasst werden, deren Brechungsindizes sich von denen unterscheiden, die mit dem mobilen Phasendetektor erfasst werden. Mit diesem Nachweissystem werden derzeit die meisten Kohlenhydratverbindungen nachgewiesen. Das System zeichnet sich durch große Universalität und einfache Bedienung aus, weist jedoch eine geringe Empfindlichkeit (Nachweisgrenze von 10-7g/ml) auf, und Änderungen in der mobilen Phase können zu Änderungen im Brechungsindex führen. Daher eignet es sich weder für die Spurenanalytik noch für den Nachweis von Gradientenelutionsproben.
(3) Der Fluoreszenzdetektor ist nur unter bestimmten Bedingungen für die Bestimmung fluoreszierender organischer Verbindungen (wie polyzyklische aromatische Kohlenwasserstoffe, Aminosäuren, Amine, Vitamine und bestimmte Proteine) geeignet, basierend auf der Fluoreszenzintensität und Konzentration des emittierten Lichts. Seine Empfindlichkeit ist sehr hoch (Nachweisgrenze liegt bei 10-12~10-14g/ml) und es kann für die Spurenanalyse und den Nachweis bei Gradientenelutionsarbeiten verwendet werden.
5. Das Datenverarbeitungssystem kann Testdaten sammeln, speichern, anzeigen, drucken und verarbeiten, um Proben zu trennen, und kann Vorbereitungs- oder Identifizierungsarbeiten korrekt durchführen